MagVigen™ – Plasma DNA Capture

產(chǎn)品內(nèi)容

• MagVigen™ 血漿 DNA 捕獲納米顆粒

• 裂解緩沖液

• 蛋白酶K

• 蛋白酶 K 緩沖液

• 洗滌緩沖液 1 庫存

• 洗脫緩沖液

所需材料

• 異丙醇

• 乙醇

• 十二烷基硫酸鈉，20%

• 磁性架（NVIGEN Cat# A20006）

MagVigen™ 血漿 DNA 捕獲試劑盒 (K61003) 能夠從血漿和血清中捕獲小的循環(huán)游離 DNA (>30bp)。

Protocols

1. 準(zhǔn)備血漿樣品：如果使用冷凍血漿，請在室溫下解凍。將血漿以 12000x g 離心 5 分鐘，以去除任何血液和細(xì)胞碎片。




2. 制備裂解緩沖液：如果有固體，則在 60°C 下加熱幾分鐘以制成澄清溶液。




3. 制備蛋白酶溶液：將蛋白酶 K 緩沖液添加到蛋白酶 K 粉末瓶中。渦旋混合均勻。儲存于-20°C。




4. 制備洗滌緩沖液 1：根據(jù)表 1 計算所需量。向每 550 ul 洗滌緩沖液 1 原液中添加 450 ul 異丙醇。每次都新鮮制作緩沖液。




5. 檢查表1的總體積來決定使用的離心管類型（1.5ml、2ml、5ml、15ml或50ml）。




6. 將蛋白酶 K 溶液添加到樣品管底部，將血漿添加到管中。渦旋 5 秒以充分混合，短暫離心。




7. 將 20% SDS 添加到管中。渦旋 5 秒以充分混合，短暫離心。




8. 將裂解緩沖液添加到管中。渦旋 1 分鐘以充分混合。短暫地旋轉(zhuǎn)下來。 60°C 孵育 30 分鐘。




9. 添加 MagVigen™ 血漿 DNA 捕獲納米顆粒。輕輕搖動小瓶使其分散。然后加入異丙醇，渦旋混勻，短暫離心，繼續(xù)渦旋 45 分鐘。




10. 將反應(yīng)管放在磁力架上沉淀珠子，直至溶液澄清（10-20 分鐘，具體取決于磁鐵的強度和樣品體積）。




11. 慢慢除去上清液。小心不要帶走任何珠子，盡可能多地除去溶液。將磁力架敲擊固體表面，使殘留溶液沉降到管底，除去所有上清液。




12. 將管從磁鐵上取下，添加洗滌緩沖液 1。通過移液或渦旋混合。如果從較大的 15 或 50 ml 試管開始，請將溶液轉(zhuǎn)移到 1.5 或 2 ml 試管中。短暫地旋轉(zhuǎn)下來。將珠子放在磁力架上沉淀（約 10 分鐘），除去上清液。將磁力架敲擊表面。除去所有上清液。




13. 使用 75% 乙醇清洗珠粒。不需要全分散珠粒。管子可以通過磁力架保持在適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｉ晕⑾蚯昂拖蚝髢A斜裝有樣品管的磁力架。然后短暫旋轉(zhuǎn)，使蓋子中沒有溶液殘留。將珠子放在磁力架上（約 3 分鐘）并除去所有上清液。在固體表面上敲擊磁力架，使上清液殘留物沉降到管底部。除去所有上清液。




14. 使用 75% 乙醇再次清洗珠粒。將珠子沉淀（約 2-3 分鐘）并除去所有上清液。




15. 將管子放在磁力架上，風(fēng)干沉淀以蒸發(fā)所有乙醇。這需要 2-3 分鐘。




16. 將所需量的洗脫緩沖液添加到珠子中，上下移液直至所有沉淀物全重新分散。將珠子分散在洗脫緩沖液中 3 分鐘。




17. 短暫地旋轉(zhuǎn)下來。然后將管子放在磁力架上 2-3 分鐘。




18. 收集上清液，不要干擾磁珠沉淀。上清液含有提取的DNA。吸取 DNA 溶液進行下游實驗時，將管子放在磁鐵旁邊。提取的 cfDNA 溶液如果不立即使用，可保存在 -20°C。

MagVigen™ – Plasma DNA Capture